ABSTRACT KIT protein is associated with the etiology of canine mast cell tumors (MCT); however, the expression patterns of KIT are highly variable. The aim of this study was to determine if KIT patterns are related with eosinophil count in MCT. Hematoxylin eosin and May Grünwald-Giemsa stain techniques were applied, histological grading and eosinophil counting were performed in 48 MCT samples. Immunohistochemical evaluation was performed with IL-5, VEGFr, and c-KIT antibodies. The percentage of immunolabeling with IL-5 and VEGFr was determined, and the samples incubated with c-KIT were graded according to the immunolabeling pattern. Comparison of the mean eosinophil count between the histological grades and the different KIT expression patterns demonstrated a significant difference between KIT pattern 1 and KIT pattern 3, KIT pattern 3 showed a higher mean of eosinophil count. There was no significant correlation between eosinophil count and KIT patterns (p = 0.2648). However, a positive correlation was observed between the KIT patterns and Patnaik and Kiupel grades (p = 0.0006 and p = 0.0267, respectively). There was no significant correlation between eosinophil count, IL-5, or VEGFr. Further studies should determine whether eosinophil counts are an independent predictor of clinical outcome or simply correlated with already known predictors.

RESUMO A proteína tirosina quinase está associada com a etiologia dos mastocitomas (MC) em cães; entretanto, a expressão dos padrões de KIT é extremamente variável. O objetivo deste estudo é determinar se os padrões de KIT estão relacionados com a contagem de eosinófilos em tumores de MC. As técnicas de hematoxilina-eosina e MayGrünwald-Giemsa foram utilizadas; as graduações histológicas e a contagem de eosinófilos foram realizadas em 48 amostras de MC. A avaliação imuno-histoquímica foi feita utilizando anticorpos anti-IL-5, VEGFr e c-KIT. Foi determinada a porcentagem de área imunomarcada com IL-5 e VEGFr, e as amostras incubadas com c-KIT foram classificadas de acordo com o padrão imuno-histoquímico observado. A comparação da média de eosinófilos entre as graduações histológicas e os padrões de KIT mostraram uma diferença significativa entre o padrão 1 e o 3 de KIT, tendo o padrão de KIT 3 apresentado uma média maior de eosinófilos. Não houve correlação significativa entre a contagem de eosinófilos das amostras e os diferentes padrões de KIT (P = 0,2648). Entretanto, uma correlação positiva foi observada entre os padrões de KIT e as graduações de Patnaik e Kiupel (P = 0,0006 e P = 0,0267, respectivamente). Não houve correlação significativa entre contagem de eosinófilos, IL-5 ou VEGFr. Estudos futuros devem ser feitos para determinar se o número de eosinófilos é um preditor independente de prognóstico ou se está correlacionado com outros preditores já estabelecidos.

Avaliou-se a inibição da produção do fator de necrose tumoral alfa (TNF-alfa) devido ao pré-tratamento com antiinflamatório esteroidal (dexametasona) e não esteroidal (diclofenaco sódico) em eqüinos com endotoxemia induzida experimentalmente. Foram utilizados 15 cavalos machos não castrados, distribuídos em três grupos de cinco animais: controle (C), diclofenaco sódico (DS) e dexametasona (DM). A endotoxemia subletal foi induzida pela infusão intravenosa (IV) de 0,1mg/kg/pv de lipopolissacarídeo (LPS) de Escherichia coli 055:B5, administrado em 250ml de solução estéril de cloreto de sódio a 0,9%, durante 15min. Os cavalos do grupo-controle foram tratados com solução de cloreto de sódio a 9% IV. Nos animais do grupo DS, administraram-se, por via oral, 2,2mg/kg de diclofenaco sódico e, nos do grupo DM, 1,1mg/kg de dexametasona IV, respectivamente, 60 e 30min antes da infusão da endotoxina. Mensurou-se, por meio de ensaio de toxicidade com células da linhagem L929, a concentração de TNF-alfa no soro e no líquido peritoneal às 0, 1¼, 3 e 6 horas após injeção do LPS. No grupo-controle, observou-se aumento significativo de TNF-alfa sérico, em relação ao valor basal e aos grupos DS e DM, 1,15 horas após a indução da endotoxemia. No líquido peritoneal, as concentrações observadas estavam abaixo daquelas da curva padrão de TNF-alfa, não havendo diferença entre os grupos (P>0,05).

The inhibition of tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) production due to pre-treatment with steroidal (dexamethazone) and non-steroidal (sodium diclofenac) anti-inflammatories was studied in horses under experimentally induced endotoxemy. Fifteen stallions were allotted into three groups of five animals each: control (C), sodium diclofenac (SD) and dexamethazone (DM). Sublethal endotoxemy was induced with 0.1mg/kg/bw Escherichia coli 055:B5 lipopolysaccharide (LPS), IV, administrated in 250ml of 0.9% sterile sodium chloride, during 15 minutes. Control group horses received 9% sodium chloride, IV. SD group animals were orally administrated 2.2mg/kg sodium diclofenac and DM horses received 1.1mg/kg dexamethazone, IV, 30 and 60 minutes before endotoxin infusion, respectively. TNF-alpha concentration was measured in serum and peritoneal fluid by toxicity assay using L929 lineage cells at 0, 1¼, 3 and 6 hours after LPS injection. Ninety minutes after endotoxemy induction, it was verified a significant increase of serum TNF-a concentration in horses from control group in relation to the basal values as well as results of horses from SD and DM groups. In peritoneal fluid, the measured concentrations were lower than those from TNF-a standard curve and difference among the groups was not verified (P>0.05).

Quinze eqüinos machos, da raça Mangalarga, com idades entre dois e três anos, foram utilizados para se avaliar os possíveis efeitos clínicos benéficos da administração de dexametasona ou diclofenaco sódico durante a endotoxemia experimental em eqüinos. Os animais foram divididos em três grupos de cinco animais cada: controle (C), diclofenaco sódico (SD) e dexametasona (DM). Todos os grupos receberam 0,1µg/kg de lipopolissarídeo de Escherichia coli 055:B5, durante 15 minutos, por via intravenosa mais: grupo SD - 2,2mg/kg de SD, por via oral, 60 minutos antes da infusão da endotoxina; grupo DM - 1,1mg/kg, por via intravenosa, 30 minutos antes da endotoxina; grupo C - 20ml de NaCl 0,9%, por via intravenosa, 30 minutos antes da endotoxina. O SD não preveniu a leucopenia, neutropenia e linfopenia ocorridas três horas após a indução da endotoxemia, porém a DM atenuou essas alterações. As taxas de proteínas plasmática e peritoneal, a concentração de glicose e de fósforo inorgânico e a contagem de células nucleadas totais peritoneais mantiveram-se inalteradas. O diclofenaco foi eficaz na prevenção da febre e alterações nos borborigmos intestinais enquanto que a dexametasona bloqueou as alterações no número de células inflamatórias em relação ao grupo controle.

Fifteen healthy Mangalarga horses, aged two to three years were used to evaluate the possible beneficial effects of dexamethasone and sodium diclofenac administration during experimental endotoxemia in horses. They were divided into three groups with five animals each: control (C), sodium diclofenac (SD) and dexamethasone (DM). All groups were given 0.1µg of Escherichia coli O55:B5 endotoxin/kg of body weight, intravenous, over 15 minutes, and one of the following preparations: group C - 20ml of 0.9% saline intravenous, 30 minutes before endoxin infusion; group SD - 2.2mg/kg, per os, 60 minutes before endotoxin infusion and group DM - 1.1 mg/kg, intravenous, 30 minutes before endotoxin infusion. No increase in rectal temperature was observed in the SD or DM treated groups. SD did not prevent the significant leukopenia, neutropenia and lymphopenia induced three hours after LPS injection, but DM attenuated these changes. No significant changes in plasma and peritoneal fluid total protein, inorganic phosphorus or glucose concentrations and in total nucleated cell count in peritoneal fluid were observed. SD was effective to prevent the fever and changes in intestinal borborygmi and DM blocked the cellular changes induced by experimental endotoxemia.

Dezesseis eqüinos adultos foram aleatoriamente divididos em quatro grupos de quatro animais que receberam inoculação intraperitoneal das seguintes suspenções: grupo I, 100×10(7) unidades formadoras de colônias (CFU) de E. coli diluídas em 500ml de solução salina a 0,9%; grupo II, 100×10(7) CFU de Bacteroides fragilis em 500ml de solução salina a 0,9%; grupo III, 100×10(7) CFU de E. coli combinados com 100×10(7) CFU de B. fragilis em 500ml de solução salina a 0,9%; grupo IV, 500ml de solução salina a 0,9%. Observou-se aumento significativo do número de leucócitos no líquido peritoneal quatro horas após as inoculações dos animais dos grupos I e II, e oito horas após as inoculações dos animais do grupo III. A contagem mais elevada foi de 516×10³ leucócitos/mm³. Aumentos significativos nas concentrações de fibrinogênio (1g/dl) e proteína total (9,1%) foram também observados. Eqüinos inoculados com culturas puras, tanto de E. coli quanto de B. fragilis, apresentaram peritonites mais brandas e autolimitantes, enquanto que eqüinos inoculados com associação das duas bactérias apresentaram alterações laboratoriais com maior intensidade e duração.

Sixteen adult horses were randomly divided into four equal groups of four animals and each group was injected intraperitoneally with one of the following suspension: Group I, 100×10(7) colony-forming units (CFU) of E. coli diluted in 500ml of 0.9% saline; Group II, 100×10(7) CFU of Bacteroides fragilis in 500ml of 0.9% saline; Group III, 100×10(7) CFU of E. coli in combination with 100×10(7) CFU of B. fragilis in 500ml of 0.9% saline; Group IV, 500ml of 0.9% saline. A significant increase in leukocyte number was observed in the peritoneal fluid by four hours after the inoculations in animals of Group I and II, and by eight hours in animals of Group III. The highest cell count observed was 516×10³ leukocytes/mm³. Significant increases in peritoneal fluid fibrinogen (1g/dl) and total protein (9.1%) concentrations were also observed. Horses inoculated with pure cultures of either E. coli or B. fragilis demonstrated mild and self-limiting peritonitis, while those inoculated with a combination of both bacteria demonstrated laboratory findings of higher intensity and duration.